Nếu bạn cần bất kỳ sự giúp đỡ, xin vui lòng liên hệ với chúng tôi
Quang phổ lưỡng sắc tròn protein của bạn trông thật hoàn hảo ngày hôm qua. Ngày nay, đường cơ sở hướng lên dưới 215 nm, tỷ lệ tín hiệu trên nhiễu đã giảm và khớp nối cấu trúc thứ cấp cho biết chuỗi xoắn alpha đã giảm từ 40% xuống 25%. Không có gì về mẫu thay đổi. Nghi phạm thông thường đang ngồi trong giá đựng mẫu: một cuvet thạch anh không sạch. Làm sạch cuvet thạch anh cho quang phổ CD là một bước thường xuyên mà các phòng thí nghiệm đánh giá thấp và đây là nơi đầu tiên cần phát hiện khi chất lượng dữ liệu suy giảm đột ngột.
Kết luận cốt lõi có thể được nêu ngay từ đầu: một cuvet trông hoàn toàn sạch ở các bước sóng khả kiến vẫn có thể bị bẩn nghiêm trọng ở bước sóng 190 đến 230 nm, nơi thực hiện hầu hết các phép đo protein CD. Sự khác biệt giữa đường cơ sở có thể sử dụng được và quang phổ bị hỏng thường là do màng quá mỏng để có thể nhìn thấy. Hướng dẫn này giải thích tại sao phương pháp quang phổ CD đặc biệt nhạy cảm với tình trạng của cuvet, cách xác định từng loại chất gây ô nhiễm, phương pháp làm sạch nào sẽ phục hồi bề mặt quang học, những lỗi nào gây ra hư hỏng vĩnh viễn và cách xác minh rằng cuvet đã thực sự sẵn sàng cho phép đo.
Các giao thức dưới đây là các quy trình thực tế được sử dụng trong công việc sinh lý protein thông thường. Chúng tương thích với cuvet thạch anh và silica nung chảy từ bất kỳ nhà sản xuất cuvet thạch anh có uy tín nào và chúng được đặt hàng từ bước rửa hàng ngày ít tác động nhất đến các bước khử nhiễm sâu hơn chỉ được sử dụng khi việc vệ sinh định kỳ là không đủ.
Lưỡng sắc tròn đo sự khác biệt nhỏ về độ hấp thụ giữa ánh sáng phân cực tròn trái và phải. Dải CD thông thường 10 mili độ tương ứng với chênh lệch độ hấp thụ khoảng 3 x 10^-4 AU, nhỏ hơn từ 10 đến 100 lần so với dải hấp thụ ghi được trong phổ UV-Vis thông thường. Do đó, bất kỳ ảnh hưởng quang học nào từ cuvet đều không phải là một sự hiệu chỉnh nhỏ; đó là tín hiệu cạnh tranh có thể vượt quá phổ thực. Độ nhạy này là lý do vì sao cuvet sạch là điều kiện tiên quyết cho dữ liệu CD hợp lệ chứ không phải là chi tiết để tối ưu hóa sau này.
Vùng cực tím xa đặt thêm gánh nặng lên vật liệu quang học. Dưới 200 nm, nước, oxy hòa tan và thậm chí cả các thành phần đệm có độ tinh khiết cao đều hấp thụ đáng kể. Cửa sổ silica hợp nhất phải truyền càng nhiều ánh sáng vốn đã hạn chế càng tốt. Cửa sổ bẩn hoặc bị hỏng sẽ làm giảm thông lượng photon, buộc máy dò đạt mức tăng cao hơn và tăng nhiễu nhanh hơn hầu hết các kỹ thuật quang phổ khác. Trong thực tế, CD tia cực tím xa dưới 210 nm là ứng dụng cuvet đòi hỏi khắt khe nhất mà phòng thí nghiệm sẽ gặp phải.
Tình trạng cuvet ảnh hưởng đến dữ liệu CD thông qua bốn cơ chế độc lập. Đầu tiên, một màng hấp thụ làm giảm ánh sáng truyền qua và tăng điện áp dynode của bộ nhân quang. Thứ hai, các hạt và vết xước siêu nhỏ phân tán ánh sáng, được phát hiện dưới dạng độ lệch đường cơ sở và nhiễu. Thứ ba, ứng suất cơ học hoặc sự ăn mòn trong thạch anh gây ra hiện tượng lưỡng chiết, chuyển đổi ánh sáng phân cực tuyến tính thành một tạo tác hình elip biểu kiến. Thứ tư, bề mặt gồ ghề hoặc lắng đọng sẽ làm thay đổi chiều dài đường truyền hiệu dụng mà chùm tia thực tế lấy mẫu. Mỗi cơ chế dẫn đến một kiểu lỗi khác nhau trong phổ, đó là lý do tại sao cần có chiến lược làm sạch có hệ thống.
Việc lựa chọn vật liệu cuvet sẽ xác định thiết bị có thể đi được bao xa trong vùng tia cực tím. Silica nung chảy tổng hợp loại JGS1 có độ trong suốt dưới 180 nm và là tiêu chuẩn cho protein CD tia cực tím xa. Thạch anh nung chảy tự nhiên được chỉ định là JGS2 truyền hợp lý đến khoảng 200 nm và có thể chấp nhận được đối với công việc CD gần tia cực tím và công việc UV-Vis thông thường. Thạch anh JGS3 được tối ưu hóa cho truyền hồng ngoại và không có chỗ trong cuvet CD. Thủy tinh Borosilicate hấp thụ mạnh ở bước sóng dưới khoảng 320 nm và hoàn toàn không phù hợp với CD.
| Lớp vật liệu | Bước sóng thấp hơn thực tế | Sử dụng CD điển hình |
|---|---|---|
| Silica nung chảy tổng hợp (JGS1) | 170-180nm | CD tia cực tím xa của protein, peptide và axit nucleic dưới 200 nm |
| Thạch anh nung chảy (JGS2) | Khoảng 200nm | CD cận UV và các phép đo UV-Vis thông thường |
| Thạch anh quang học hồng ngoại (JGS3) | Khoảng 250nm | Không nên dùng cho CD UV |
| Thủy tinh borosilicat | Khoảng 300-320nm | Không thể sử dụng cho các phép đo UV dưới 320 nm hoặc CD |
Ngay cả một cuvet sạch cũng có thể không sử dụng được nếu cửa sổ bị trầy xước. Các vết xước làm tán xạ ánh sáng và tạo ra các biến đổi cục bộ về chiều dài đường đi; chúng cũng thu thập các chất gây ô nhiễm trong chu kỳ làm sạch tiếp theo và gần như không thể loại bỏ được. Đây là lý do tại sao việc vệ sinh không thể tách rời khỏi việc xử lý: việc sử dụng bất cẩn sẽ gây ra hư hỏng khiến ngay cả quy trình tốt nhất cũng không thành công.
Ngay cả khi cuvet được sử dụng riêng với nước có độ tinh khiết cao và dung dịch đệm cấp HPLC, màng nhiễm bẩn vẫn tích tụ. Bản thân các mẫu sinh học là nguồn phổ biến nhất vì protein, peptide, axit nucleic và lipid có xu hướng hấp phụ trên bề mặt silica nung chảy. Tiếp xúc với da, không khí trong phòng thí nghiệm và thậm chí cả vật liệu đóng gói đều tạo thêm cặn bẩn. Việc xác định loại màng rất hữu ích vì mỗi loại ô nhiễm sẽ phản ứng với một loại hóa chất tẩy rửa khác nhau.
| chất gây ô nhiễm | Nguồn điển hình | Dấu hiệu nhìn thấy được | Hiệu ứng điển hình trên phổ CD |
|---|---|---|---|
| Màng protein | Mẫu protein được để khô; hấp phụ trong quá trình đo | Thường vô hình | Đường cơ sở dốc và độ hấp thụ tăng dưới 230 nm; dải âm giả gần 218 nm |
| Màng lipid hoặc kỵ nước | Liposome, huyết thanh, nước rỉ chất làm dẻo | Hạt nước trên cửa sổ | Tán xạ và tiếng ồn cơ bản; sụn chêm không đều |
| Tinh thể muối đệm | Sự bay hơi của giọt hoặc mẫu có hàm lượng muối cao | Những đốm tinh thể màu trắng trên mặt | Hấp thụ và tán xạ băng thông rộng mạnh; đường cơ sở lởm chởm |
| Dấu vân tay | Xử lý không có găng tay | Vết bẩn mờ nhạt, thường không được chú ý | Hấp thụ mạnh dưới 250 nm; độ lệch đường cơ sở và độ elip biểu kiến |
| Bụi và sợi | Không khí, khăn giấy, hộp cuvet đã mở | Các hạt có thể nhìn thấy trên cửa sổ | Tán xạ Rayleigh, nhiễu tăng đột biến, tín hiệu hữu dụng giảm |
| Dư lượng dung môi | Rửa không hoàn toàn sau khi rửa bằng dung môi | không có | Dải hấp thụ phụ thuộc bước sóng, tùy thuộc vào dung môi |
Để hiểu tại sao kỷ luật làm sạch lại quan trọng, hãy xem xét tác dụng thực sự của một màng chất gây ô nhiễm mỏng ở bước sóng liên quan đến CD. Các thanh bên dưới hiển thị các giá trị độ hấp thụ biểu kiến đại diện được thêm vào ở bước sóng 220 nm bởi các loại chất gây ô nhiễm khác nhau còn sót lại trên cuvet thạch anh. Bước sóng này nằm trong vùng UV xa, nơi nhiễm sắc thể peptide tạo ra tín hiệu CD mạnh nhất. Các giá trị này mang tính minh họa và dựa trên các quan sát được báo cáo từ các phòng thí nghiệm phát triển phương pháp. Đọc chúng dưới dạng xếp hạng thực tế: độ hấp thụ bổ sung càng lớn thì chất gây ô nhiễm càng phải được loại trừ mạnh mẽ hơn trong quá trình làm sạch.
Dấu vân tay là chất gây ô nhiễm phổ biến có hại nhất, điều này gây ngạc nhiên cho nhiều người dùng. Dịch tiết của da chứa axit amin, urê và axit béo hấp thụ mạnh ở bước sóng dưới 250nm. Một cú chạm vô tình lên mặt quang học có thể tăng thêm hơn 0,1 AU ở bước sóng 220 nm. Màng protein xếp thứ hai và chúng nguy hiểm nhất vì mắt đơn lớp không thể nhìn thấy được. Ngay cả màng protein đơn lớp phụ cũng tạo ra đường cơ sở dốc ở vùng amide. Độ dốc thường bị nhầm lẫn với độ lệch của thiết bị hoặc bộ đệm không khớp. Tinh thể muối và bụi đóng vai trò chủ yếu là trung tâm tán xạ hơn là chất hấp thụ. Sự tán xạ tạo ra nhiễu và độ lệch dọc không thể loại bỏ bằng phép trừ trống đơn giản. Dư lượng dung môi là vấn đề dễ khắc phục nhất, nhưng sự hiện diện của nó thường cho thấy bước xả nước đã diễn ra quá vội vàng. Các giá trị tuyệt đối trong biểu đồ mang tính đại diện, không mang tính phổ quát; chúng phụ thuộc vào độ dày màng, bước sóng chính xác và chiều dài đường đi của cuvet. Điều quan trọng là thứ tự cường độ: các chất gây ô nhiễm trong phạm vi 0,05 đến 0,1 AU tách đường cơ sở CD phẳng khỏi đường cơ sở dốc ra khỏi phạm vi có thể sử dụng được. Bài học thực tế rút ra là một cuvet hoàn hảo về mặt hình ảnh vẫn có thể bị bẩn trong vùng cực tím xa, vì vậy việc xác minh không bao giờ là tùy chọn.
Để so sánh bê tông, một cuvet thạch anh chứa đầy nước được bảo trì tốt phải có độ lệch đường cơ sở dưới 0,01 AU ở bước sóng 220 nm. Khi độ lệch vượt quá 0,05 AU, phổ CD sẽ hiển thị đường cơ sở nhiễu cao, dưới 220 nm và quá trình giải mã cấu trúc thứ cấp trở nên không đáng tin cậy. Cơ sở dữ liệu về phổ protein tham chiếu giả định rằng sự đóng góp của cuvet là không đáng kể; việc tái tạo các điều kiện đó đòi hỏi nguyên tắc vệ sinh tương tự mà các phòng thí nghiệm tham khảo sử dụng.
Quy trình hàng ngày được thiết kế cho một mục đích: loại bỏ mẫu trước khi nó có cơ hội hấp phụ vĩnh viễn. Đối với cuvet dùng trong CD, việc vệ sinh là một phần của quy trình đo chứ không phải là công việc thường xuyên. Cuvet được rửa sạch đúng cách sau mỗi lần đo hiếm khi cần phải làm sạch sâu. Toàn bộ quy trình mất khoảng năm phút và chỉ sử dụng các thuốc thử an toàn cho silica nung chảy.
Một số điểm thực tế tạo nên sự khác biệt giữa đường cơ sở hoàn hảo và đường cơ sở cận biên. Luôn xả cuvet bằng pipet thay vì đổ. Sử dụng thể tích lớn: rửa 10 thể tích có nghĩa là gấp 10 lần thể tích bên trong cuvet chứ không phải 10 giọt. Việc rửa cuối cùng bằng metanol hoặc etanol được khuyến khích thực hiện cho công việc CD vì metanol bay hơi nhanh và ngăn ngừa các đốm nước. Ví dụ, một giao thức CD nổi tiếng chỉ định rửa bằng nước và metanol bằng cách sử dụng thiết lập làm sạch cuvet và làm khô bằng nitơ; công thức đơn giản đó vẫn là chuẩn mực cho công việc thường ngày.
| Bước | Giải pháp | Thời gian liên lạc | Tại sao nó quan trọng |
|---|---|---|---|
| Loại bỏ mẫu số lượng lớn | Bộ đệm mẫu | Một vài giây | Ngăn chặn sự hấp thụ protein từ sụn khô |
| Xả nước | Nước siêu tinh khiết | 10-15 tập | Loại bỏ muối và vật liệu liên kết lỏng lẻo nhất |
| Giặt bằng chất tẩy rửa | Chất hoạt động bề mặt tương thích thạch anh trung tính 1-2% | 5-10 phút | Hòa tan màng protein và lipid |
| Nước rửa loại bỏ chất tẩy rửa | Nước siêu tinh khiết | 10-15 tập | Chất tẩy rửa còn sót lại có bước sóng hấp thụ dưới 220 nm, do đó cần phải xả kỹ |
| Rửa dung môi | Metanol hoặc etanol cấp quang học | 2-3 tập | Thay thế nước, hòa tan cặn hữu cơ, làm khô nhanh |
| Sấy khô | Lọc nitơ hoặc không khí khô sạch | Cho đến khi khô hoàn toàn | Ngăn chặn các đốm nước và cặn khoáng |
Cấu trúc của cuvet cũng ảnh hưởng đến độ tin cậy của quy trình hàng ngày. Một tế bào nguyên khối được hợp nhất hoàn toàn không có đường nối xi măng có thể bẫy dung môi hoặc bong ra sau khi làm sạch nhiều lần. Cuvet thạch anh loại này có thể được siêu âm nếu cần thiết, trong khi các cuvet hai mảnh gắn xi măng phải được xử lý nhẹ nhàng hơn. Khi bạn chọn một cuvet mới cho hoạt động CD, cần kiểm tra xem các mặt quang học có phải là silica nung chảy được đánh bóng và hình dạng đã được nung chảy hoàn toàn hay không.
Cuvette thạch anh silic nung chảy cho UV-Vis và huỳnh quang Cuvet thạch anh nung chảy hoàn toàn này phù hợp với độ hấp thụ và huỳnh quang từ 170 đến 2700 nm. Các mặt quang học được đánh bóng và kết cấu chắc chắn của nó hỗ trợ làm sạch sâu và xác minh hàng ngày một cách đáng tin cậy. Xem sản phẩm → Khi cuvet không được xác minh sau quy trình hàng ngày, việc làm sạch sâu hơn là hợp lý. Nguyên tắc chính là chọn thuốc thử tấn công cặn lắng mà không tấn công thạch anh. Silica nung chảy có độ bền hóa học cao nhưng không thể phá hủy được: nó hòa tan trong axit flohydric và ăn mòn chậm trong kiềm đậm đặc nóng. Mọi công thức làm sạch sâu dưới đây đều tôn trọng những giới hạn đó.
Màng protein được loại bỏ tốt nhất bằng quá trình tiêu hóa hơn là bằng hóa học mạnh. Cách tiếp cận tiêu chuẩn là dung dịch pepsin ở nồng độ 1 đến 2 mg/mL trong axit clohydric 0,1 M, ủ ở 37 độ C trong một đến hai giờ. Enzym phá vỡ protein bị hấp phụ thành các peptide nhỏ dễ dàng rửa sạch. Sau khi ủ, rửa kỹ cuvet bằng nước siêu tinh khiết, sau đó bằng metanol, sau đó làm khô bằng nitơ. Một lựa chọn hiệu quả khác là dung dịch natri dodecyl sunfat 0,5 đến 1% được làm ấm ở nhiệt độ 40 đến 50 độ C, giúp hòa tan protein và lipid; nó phải được rửa kỹ hơn nữa vì bản thân SDS hấp thụ tia cực tím xa.
Cặn muối và cặn khoáng phản ứng với axit loãng. Axit nitric ở nồng độ 1 đến 2 M là lựa chọn thông thường vì nó hòa tan hầu hết các cặn vô cơ và không để lại gì sau khi rửa sạch. Ngâm trong 15 đến 30 phút ở nhiệt độ phòng. Không kết hợp làm sạch bằng axit với siêu âm, vì rung động tấn công các cạnh mặt đất lộ ra và làm tăng tốc độ phản ứng. Màng hữu cơ thông thường được loại bỏ bằng trình tự dung môi: metanol, sau đó là axeton, rồi đến etanol, rồi đến nước. Trình tự này bắt đầu bằng dung môi hòa tan trong nước, hòa tan màng kỵ nước và kết thúc bằng dung môi trộn với nước để không xảy ra bước kết tủa. Nước rửa cuối cùng sẽ loại bỏ tất cả dấu vết của dung môi hữu cơ. Riêng axeton không phải là bước lý tưởng khi dùng làm bước đầu tiên trên cuvet ướt bị nhiễm muối, vì axeton làm kết tủa muối và có thể cố định protein trên bề mặt.
Cuvet có thể tháo rời cần một kỹ thuật khác. Các cửa sổ phải được tách riêng, làm sạch riêng lẻ trên bề mặt phẳng bằng PTFE hoặc khăn lau phòng sạch bằng khăn giấy không có xơ được làm ẩm bằng dung môi và sấy khô trong luồng không khí sạch. Siết quá chặt vỏ kim loại sau khi vệ sinh là một lỗi phổ biến; nó làm biến dạng các cửa sổ và tạo ra hiện tượng lưỡng chiết biến dạng, đây chính xác là điều mà phép đo CD không thể chịu đựng được. Lắp ráp lại chặt chẽ cộng với một phần nhỏ vòng quay và xác minh độ dài đường truyền bằng giải pháp tham chiếu.
| Gửi tiền | Quy trình được đề xuất | Thời gian liên lạc | Không bao giờ sử dụng |
|---|---|---|---|
| Màng protein hấp phụ | Pepsin 1-2 mg/mL trong HCl 0,1 M ở 37 độ C | 1-2 giờ | Chất kiềm đậm đặc nóng |
| Cân muối và khoáng chất | Axit nitric 1-2 M ở nhiệt độ phòng | 15-30 phút | Axit flohydric hoặc bất kỳ chất tẩy rửa có chứa florua nào |
| màng lipid | Chất hoạt động bề mặt trung tính 1-2% ở 40 độ C | 10-15 phút | Miếng đệm hoặc bột mài mòn |
| Tiền gửi hữu cơ chung | Metanol, axeton, etanol, nước | 2-3 tập of each | Lau khô bằng khăn giấy |
| Tiền gửi không xác định hoặc hỗn hợp | 10% axit nitric, tiếp theo là 1-2% chất hoạt động bề mặt | 30 phút mỗi lần | Hỗn hợp tự làm nóng như dung dịch cá piranha nóng |
Làm sạch bằng siêu âm có thể đẩy nhanh mọi quy trình trên, nhưng chỉ đối với các cuvet nguyên khối được nung chảy hoàn toàn. Nếu cuvet có cửa sổ bằng xi măng, mối nối có thể bị rò rỉ hoặc hỏng khi rung siêu âm. Khi nghi ngờ, hãy kiểm tra tài liệu của nhà cung cấp trước khi đặt cuvet vào bể siêu âm. Cuvet làm từ thạch anh thành dày cồng kềnh có thể chịu được chu kỳ siêu âm tiêu chuẩn trong phòng thí nghiệm từ 5 đến 10 phút, nhưng tế bào huỳnh quang thành mỏng dễ vỡ hơn.
Hầu hết các cuvet bị hư hỏng vĩnh viễn không phải do mẫu mà do sai sót trong quá trình vệ sinh. Bản thân vật liệu này ổn định về mặt hóa học, nhưng các cửa sổ mỏng được đánh bóng dễ bị ảnh hưởng bởi thuốc thử, chất mài mòn và xử lý bất cẩn. Hiểu các chế độ lỗi sẽ bảo vệ cả cuvet và dữ liệu CD. Bảng dưới đây tóm tắt các lỗi phổ biến nhất và hậu quả của chúng.
| sai lầm | Hiệu quả ngay lập tức | Thiệt hại lâu dài |
|---|---|---|
| Làm sạch bằng axit hydrofluoric hoặc các sản phẩm florua | Cửa sổ chuyển sang mây trong vòng vài phút | Silica bị hòa tan; tế bào phải được loại bỏ |
| NaOH đậm đặc hoặc KOH đậm đặc | Bề mặt bắt đầu đóng băng | Khắc vĩnh viễn và tán xạ ánh sáng nghiêm trọng |
| Miếng cọ rửa, bột mài mòn hoặc dụng cụ kim loại | Những vết xước nhỏ xuất hiện trên mặt | Các tạo tác CD phân tán và rõ ràng bắt chước các dải thực |
| Lau khô bằng khăn giấy | Có thể nhìn thấy sương mù và xơ vải | Sự trầy xước không thể đảo ngược của thạch anh đánh bóng |
| Bể siêu âm cho tế bào xi măng | Khớp có thể bị rò rỉ hoặc mở | Ô mất hiệu chuẩn đường dẫn |
| Dung môi hữu cơ trước khi loại bỏ muối nước | Tinh thể muối kết tủa | Tinh thể có thể làm xước tế bào khi lau |
| Mẫu để lại trong tế bào qua đêm | Dạng màng protein và muối cứng | Yêu cầu làm sạch mạnh có thể làm hỏng bề mặt |
| Rửa sạch bằng nước máy | Các ion kim loại lắng đọng trên silica | Hấp thụ tia cực tím và bù đắp đường cơ sở bổ sung |
| Hấp khử trùng lặp đi lặp lại các tế bào đã lắp ráp | Tích lũy căng thẳng dần dần | Sự lưỡng chiết căng thẳng và đường cơ sở CD bị biến dạng |
Dung dịch Piranha, hỗn hợp axit sulfuric đậm đặc và hydro peroxide, đôi khi được sử dụng để làm sạch vi điện tử. Đối với cuvet quang học, điều này thường không được khuyến khích. Phản ứng tỏa nhiệt và có thể khắc hoặc làm mờ thạch anh nếu nhiệt độ tăng; nó cũng gây ra mối nguy hiểm nghiêm trọng về an toàn trong phòng thí nghiệm. Nếu cặn chống lại axit nitric và chất tẩy rửa, cuvet sẽ được thay thế một cách kinh tế hơn so với rủi ro trong bể cá piranha.
Xác minh là bước mà hầu hết các phòng thí nghiệm đều bỏ qua và là bước phát hiện vấn đề trước khi thu thập dữ liệu. Chỉ kiểm tra trực quan thôi là chưa đủ vì hầu hết các phim liên quan đến CD đều là lớp phụ. Trình tự sau đây chuyển từ kiểm tra đơn giản sang kiểm tra dựa trên thiết bị.
Cuvette vẫn có thể được lưu
| Cuvette nên được thay thế
|
Các giá trị ngưỡng ở trên là giá trị mặc định thực tế được sử dụng trong phòng thí nghiệm CD protein. Một cuvet vượt qua tất cả sáu bước kiểm tra sẽ không phải là yếu tố hạn chế trong phép đo của bạn. Nếu xác minh không thành công, hãy lặp lại quá trình làm sạch sâu một lần; nếu nó lại thất bại, hãy thay thế ô thay vì dành nhiều giờ hơn cho một nguyên nhân đã mất.
Quy trình làm sạch tốt nhất bắt đầu từ quyết định mua hàng. Cuvet được chỉ định chính xác cho CD sẽ làm sạch nhanh hơn, xác minh dễ dàng hơn và tạo ra các đường cơ sở có thể tái tạo nhiều hơn trong suốt thời gian sử dụng của nó. Ba quyết định chi phối: cấp vật liệu, cấu trúc tế bào và chiều dài đường truyền.
Cấp vật liệu xác định bước sóng ngắn nhất có thể sử dụng được. Đối với CD tia cực tím xa dưới 210 nm, hãy chỉ định silica nung chảy tổng hợp JGS1 có khả năng truyền dẫn được ghi nhận trong phạm vi 170 đến 220 nm. Thạch anh nung chảy JGS2 được chấp nhận cho các phép đo ở trên 210 nm. Cấp độ phải được nêu trên giấy chứng nhận của nhà cung cấp; nếu không, cuvet có thể không dành cho CD. Xây dựng xác định khả năng tương thích làm sạch. Các tế bào nguyên khối được hợp nhất hoàn toàn không có chất kết dính hữu cơ và có thể được ngâm trong bất kỳ dung dịch làm sạch nào được liệt kê ở trên, bao gồm cả siêu âm ngắn. Tế bào xi măng rẻ hơn nhưng không thích hợp để làm sạch mạnh. Các ô có thể tháo rời mang lại khả năng tiếp cận tốt nhất tới các cửa sổ để làm sạch sâu và là lựa chọn tiêu chuẩn cho các đường dẫn rất ngắn. Các thẻ bên dưới tóm tắt độ dài đường dẫn tiêu chuẩn và các ứng dụng CD được khuyến nghị của chúng.
Sử dụng cho các mẫu protein đậm đặc và đo ở bước sóng 185 nm. Thể tích mẫu khoảng 10-20 µL. Thường được cung cấp dưới dạng ô có thể tháo rời để tránh bẫy bong bóng.
Sự thỏa hiệp tốt cho CD tia cực tím xa trong khoảng từ 185 đến 220 nm. Thể tích khoảng 50-100 µL. Khuyến nghị cho dung dịch protein 5 đến 20 mg/mL.
Độ dài đường dẫn CD phổ biến nhất. Thể tích khoảng 100-200 µL. Thích hợp cho các phép đo tia cực tím xa và gần tia cực tím với nồng độ mẫu vừa phải.
Mở rộng độ nhạy cho CD tia cực tím gần trong khi vẫn cho phép hoạt động ở tia cực tím xa. Thể tích khoảng 200-400 µL.
Tốt nhất cho CD gần tia cực tím của dư lượng thơm và đồng yếu tố trên 250 nm. Thể tích khoảng 500-1000 µL.
Chiều dài đường truyền tiêu chuẩn cho UV-Vis và CD gần UV; nói chung là quá hấp thụ đối với tia cực tím xa dưới 200 nm với dung dịch đệm nước. Thể tích khoảng 1-2ml.
Ngoài chiều dài đường truyền, hãy xem xét đường dẫn quang hoàn chỉnh. Các mặt cửa sổ phải được đánh bóng theo thông số kỹ thuật ít trầy xước và cuvet phải không có hiện tượng lưỡng chiết biến dạng; một thử nghiệm đơn giản giữa các bản phân cực chéo cho thấy độ căng quá mức. Cuvet có thành đen hoặc cửa sổ bị che rất hữu ích cho nghiên cứu huỳnh quang nhưng không cần thiết cho CD tiêu chuẩn. Cấu trúc không có kim loại là một lợi thế nếu cuvet được sử dụng với bộ đệm tấn công khung kim loại.
Cuvette thủy tinh thạch anh trong suốt cho dụng cụ quang học Được thiết kế cho máy quang phổ UV-Vis và huỳnh quang, cuvet thạch anh này chịu được hầu hết các hóa chất và chịu được nhiệt độ hoạt động cao. Độ rõ quang học và độ bền của nó giúp cho việc xử lý và lưu trữ lâu dài trở nên thiết thực. Xem sản phẩm → Cách bảo quản và xử lý cuvet giữa các lần đo xác định tần suất phải vệ sinh cuvet. Cửa sổ silica nung chảy sẽ loại bỏ các màng từ bụi trong không khí, dấu vân tay và thậm chí cả hơi của dung môi hữu cơ được bảo quản trong cùng một tủ. Những thói quen sau đây sẽ giúp cuvet ở trạng thái quang học trong nhiều năm.
Quy tắc xử lý: chỉ giữ cuvet ở thành bên mờ hoặc vành trên, đeo găng tay nitrile không bột và sử dụng nhíp có đầu PTFE khi chuyển tế bào. Không bao giờ chạm vào các mặt quang học được đánh bóng. Sử dụng hộp đựng cuvet chuyên dụng, có lớp lót mềm để bảo quản và vận chuyển, đồng thời giữ cho tế bào thẳng đứng hoặc đặt phẳng trên bề mặt sạch sẽ không có xơ vải. Sự tiếp xúc giữa kính với kính, xảy ra khi các cuvet được xếp chồng lên nhau trong ngăn kéo, là nguồn phổ biến gây ra các vết dăm ở cạnh.
Quy tắc bảo quản: bảo quản cuvet trống và khô, tháo nắp hoặc nút đậy hoặc đặt lỏng lẻo để hơi ẩm không ngưng tụ bên trong. Không bảo quản cuvet ngâm trong dung môi, metanol hoặc nước; tiếp xúc lâu với dung môi có thể làm mềm các tế bào đã kết dính và nước đọng tạo điều kiện cho tảo hoặc màng vi khuẩn phát triển. Làm sạch lại cuvet đã bảo quản sau hơn một tuần không sử dụng, vì ngay cả việc bảo quản không có bụi cũng cho phép một màng hữu cơ mỏng tích tụ trên silica nung chảy.
Lịch bảo trì: kiểm tra tất cả các cuvet CD hàng tuần để phát hiện màng và vết xước có thể nhìn thấy; làm sạch sâu chúng định kỳ hàng tháng hoặc sớm hơn nếu các bước kiểm tra cơ bản không còn sạch nữa; thay cuvet sau hai lần xác minh thất bại liên tiếp. Nếu phòng thí nghiệm chạy CD hàng ngày, hãy giữ ít nhất hai cuvet phù hợp cho mỗi hệ thống đệm để có thể làm sạch một cuvet trong khi sử dụng cuvet kia. Quét nhanh đường truyền UV-Vis trên cuvet rỗng sạch vài tháng một lần để xác định xem cửa sổ có bị lão hóa chậm hay không.
Đối với các phòng thí nghiệm, nhà phân phối và người mua OEM, chi phí dài hạn của cuvet bị chi phối bởi tính nhất quán và khả năng làm sạch chứ không phải giá ban đầu. Cuvet từ nhà sản xuất thạch anh với nguyên liệu thô cấp quang học được kiểm soát và quá trình xử lý được ghi chép sẽ làm sạch có thể lặp lại trong nhiều năm; một ô giá rẻ có cấp độ không chắc chắn sẽ tạo ra các biến thể cơ bản tinh tế khó theo dõi. Đây là lý do tại sao việc mua sắm phải được coi là một phần của hệ thống chất lượng.
Khi bạn yêu cầu báo giá từ nhà sản xuất hoặc nhà cung cấp cuvet thạch anh, hãy yêu cầu tài liệu cụ thể. Loại vật liệu phải được ghi là JGS1, JGS2 hoặc ký hiệu quốc tế tương đương. Nhà cung cấp phải cung cấp đường cong truyền đo được trong phạm vi 190 đến 260 nm, dung sai chiều dài đường truyền là cộng hoặc trừ 0,01 mm hoặc cao hơn và xác nhận rằng cửa sổ không bị biến dạng. Đối với tác phẩm CD, chứng nhận không bị biến dạng quan trọng hơn đối với UV-Vis, vì hiện tượng lưỡng chiết tạo ra tạo tác quang học trực tiếp. Ngoài ra, hãy yêu cầu khả năng tương thích làm sạch của tế bào: liệu nó được nung chảy hoàn toàn hay được gắn xi măng và liệu nó có thể được siêu âm hay không.
Đối với các nhà bán buôn và nhà phân phối mua số lượng lớn, việc đóng gói và truy xuất nguồn gốc cũng quan trọng như quang học. Tế bào phải được đựng trong hộp bảo vệ riêng có ghi số lô trên nhãn. Tính nhất quán theo từng đợt là rất quan trọng; giấy chứng nhận cho mỗi lô sẽ ngăn ngừa tình trạng một cuvet hoạt động khác với một cuvet khác. Điều đáng hỏi là liệu nhà sản xuất có cung cấp kích thước tùy chỉnh, thiết kế có thể tháo rời và cửa sổ tùy chỉnh mà không cần số lượng đặt hàng tối thiểu lớn hay không. Diêm Thành Mingyang Quartz Products Co., Ltd. là nhà sản xuất sản phẩm thạch anh ở Diêm Thành, Trung Quốc, và đóng vai trò là cơ sở sản xuất của Jinzhou Mingde Quartz Glass Co., Ltd.; công ty sản xuất cuvet thạch anh, dụng cụ thạch anh trong phòng thí nghiệm, tấm thạch anh quang học và các thành phần thạch anh tùy chỉnh cho khách hàng trong phòng thí nghiệm và công nghiệp trên toàn cầu. Mối quan hệ trực tiếp với nhà sản xuất mang lại cho người mua quyền kiểm soát cấp độ, chứng nhận và chế tạo tùy chỉnh.
Có phương pháp nào tốt nhất để làm sạch cuvet thạch anh cho quang phổ CD không?Phương pháp đáng tin cậy nhất là trình tự tiêu chuẩn: xả mẫu, rửa bằng dung dịch đệm, rửa bằng nước siêu tinh khiết, rửa bằng chất tẩy tương thích thạch anh trung tính 1-2%, rửa lại bằng nước, rửa bằng metanol hoặc etanol và làm khô bằng nitơ. Điểm quan trọng là không bao giờ để mẫu khô trong cuvet và kiểm tra kết quả bằng đường cơ sở nước 220 nm. |
Tôi có thể sử dụng bể siêu âm để làm sạch cuvet thạch anh CD không?Chỉ khi cuvet có cấu trúc liền khối hoàn toàn. Cuvet xi măng hoặc hai phần có thể tách ra hoặc rò rỉ khi rung siêu âm. Kiểm tra tài liệu của nhà sản xuất; khi nghi ngờ, thay vào đó hãy sử dụng phương pháp ngâm thủ công. |
Làm cách nào để loại bỏ màng protein không bong ra khi dùng chất tẩy rửa?Sử dụng chất phân hủy bằng enzyme như pepsin ở nồng độ 1 đến 2 mg/mL trong axit clohydric 0,1 M ở 37 độ C trong một đến hai giờ. Rửa sạch sau đó. Tránh dùng natri hydroxit nóng vì nó sẽ ăn mòn cửa sổ thạch anh. |
Dấu vân tay có thực sự ảnh hưởng đến số đo CD không?Vâng, và đáng kể. Dư lượng dấu vân tay chứa axit amin và axit béo hấp thụ dưới 250 nm; một cú chạm vô tình có thể tăng thêm 0,05 đến 0,1 AU ở bước sóng 220 nm và phá hủy độ phẳng đường cơ sở. Luôn xử lý cuvet gần thành phủ mờ trong khi đeo găng tay không chứa bột. |
Bao lâu nên vệ sinh cuvet thạch anh cho quang phổ CD?Sau mỗi lần sử dụng, đặc biệt khi mẫu chứa protein, lipid hoặc muối. Xả và rửa cuvet ngay sau khi đo. Cuvette không được sử dụng trong hơn một tuần nên được làm sạch lại trước lần đo tiếp theo. |
Khi nào nên thay cuvette thạch anh thay vì làm sạch?Thay cuvet khi hai chu kỳ làm sạch sâu liên tiếp không khôi phục được đường cơ sở, khi có vết xước nhìn thấy được trên bề mặt quang học, khi tế bào bị rò rỉ hoặc khi bề mặt đóng băng biểu thị sự ăn mòn. Cuvet silica nung chảy được xử lý đúng cách có thể tồn tại trong nhiều năm; nguyên nhân thông thường gây ra hư hỏng sớm là axit hydrofluoric, kiềm đậm đặc nóng và mài mòn cơ học. |
Để biết thông số kỹ thuật của cuvet, hình học tiêu chuẩn và các loại thạch anh có sẵn trong phạm vi sản xuất, hãy xem cuvette thạch anh cho quang phổ trang.
Nếu ứng dụng CD của bạn cần chiều dài đường dẫn không chuẩn, thiết kế có thể tháo rời hoặc loại silica nung chảy cụ thể, thì chế tạo đồ thạch anh tùy chỉnh dịch vụ hỗ trợ sản xuất một lần và hàng loạt.
Là nhà sản xuất và cung cấp sản phẩm thạch anh, Công ty TNHH Sản phẩm thạch anh Diêm Thành Mingyang sản xuất cuvet thạch anh, dụng cụ thạch anh trong phòng thí nghiệm, tấm thạch anh quang học và các bộ phận liên quan cho quang phổ CD, phân tích UV-Vis và các ứng dụng quang học khác. Công ty hoạt động như cơ sở sản xuất của Jinzhou Mingde Quartz Glass Co., Ltd., phục vụ khách hàng trong phòng thí nghiệm, công nghiệp và bán buôn trên các thị trường toàn cầu.